大提柱式質(zhì)粒DNAout
產(chǎn)品及特點(diǎn) 本試劑盒是用于質(zhì)粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經(jīng)堿裂解法處理，再通過(guò)離心吸附柱，專一結(jié)合DNA，zui后洗去雜質(zhì)，快速提取質(zhì)粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內(nèi)完成。使用本試劑盒可從50-100 mL過(guò)夜培養(yǎng)的菌液純化得到高達(dá)300-500 ug的高純度質(zhì)粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉(zhuǎn)化、測(cè)序及PCR等。
1． 快速、步驟少，整個(gè)操作在半個(gè)小時(shí)之內(nèi)完成。
2． 純度高，采用本試劑盒提取的質(zhì)粒OD比值在1.8-2.0之間。
3． 產(chǎn)量高，每毫升過(guò)夜培養(yǎng)的細(xì)菌可以提取到2-5 ug/mL。
4． 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質(zhì)粒。
5． 價(jià)格低，比多數(shù)國(guó)內(nèi)同類產(chǎn)品的價(jià)格更便宜。
規(guī)格及成分 成 份 5次包裝 10次包裝
溶液A 30 mL 60 mL
溶液B 30 mL 60 mL
RNase A溶液（10mg/mL） 0.3 mL 0.6 mL
溶液C 40 mL 80 mL
大提離心吸附柱 5套 10套
通用洗柱液 100 mL 200 mL
DNA洗脫液2.0 10 mL×2 50 mL
使用手冊(cè) 1份 1份
運(yùn)輸及保存 RNase A溶液需要-20℃保存，其余成分可室溫或4℃保存，如有沉淀可加熱溶解后再使用。
自備試劑 無(wú)。
使用方法 1. 用250 mL離心管收集100-300 mL菌液，5000 rpm 離心10分鐘，去除上清。
2. 往細(xì)菌沉淀中加入6 mL溶液A，充分振蕩懸?。?次使用時(shí)需要將RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均勻，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存）。注意：充分重懸細(xì)胞沉淀使之無(wú)細(xì)胞結(jié)塊狀物對(duì)于獲得高的質(zhì)粒產(chǎn)量十分重要。
3. 加入6 mL 溶液B，溫和翻轉(zhuǎn)10 余次至透明。若混合液不透明，應(yīng)減少細(xì)菌的用量或室溫放置5-10分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩，否則細(xì)菌基因組DNA將斷裂為小片段，與質(zhì)粒難以分離，污染質(zhì)粒DNA。
4. 加入冰浴的8 mL 溶液C，顛倒混勻，冰上放置10分鐘?；旌衔镏袑⒂邪咨鯛钗镄纬?。注意不要過(guò)分振蕩。
5. 6000 rpm離心10分鐘。如果離心管承受能力強(qiáng)，離心速度還可以適當(dāng)提高以充分沉淀絮狀物。
6. 將上清液（約20 mL）轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，放入50 mL 套管中。
7. 6000 rpm 離心5 分鐘，質(zhì)粒DNA將與離心吸附柱中的膜結(jié)合。棄穿透液。
8. 將10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘后6000 rpm 離心5分鐘，棄穿透液。
9. 重復(fù)上步一次，即將10 mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘后6000 rpm 離心5分鐘，棄穿透液。
10. 室溫6000 rpm 空甩5分鐘，棄穿透液。注意：此步對(duì)去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會(huì)影響DNA的使用。
11. 將離心吸附柱放入一個(gè)自備的、干凈的50 mL塑料離心管中，加1 mL DNA洗脫液2.0（洗脫液如加熱到50-65℃效果更佳），室溫靜置2分鐘后6000rpm 離心5分鐘，收集液即是質(zhì)粒DNA溶液。
12. 本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強(qiáng)，所以再用1 mL DNA洗脫液2.0洗脫3-4次才能把絕大部分質(zhì)粒DNA洗脫下來(lái)。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA洗脫液不夠，可以用自備的DEPC水代替。注：一般情況下，*次洗脫可以洗脫約25%的質(zhì)粒DNA；第二次洗脫可以洗脫約35%的質(zhì)粒DNA；第三次洗脫可以洗脫約20%的質(zhì)粒DNA；第四次洗脫可以洗脫約10%的質(zhì)粒DNA；第五次洗脫可以洗脫約8%的質(zhì)粒DNA。
13. 合并所得質(zhì)粒DNA，立即使用或-20℃儲(chǔ)存。如果需要使用液相內(nèi)毒素清除劑清除質(zhì)粒DNA中的內(nèi)毒素，可以直接將此步所得的DNA溶液用于去內(nèi)毒素處理。如果DNA濃度太低，可以另購(gòu)本公司的核酸濃縮劑進(jìn)行濃縮。
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