鼠抗人Bcl-X單克隆抗體操作步驟:
1 . 切片常規(guī)脫蠟至水。如需抗原修復,可在此步后進行
⒉ 緩沖液洗 3min/2 次。
⒊ 為了降低內源性過氧化物酶造成的非特異性背景染色,將切片放在 Hydrogen Peroxide Block 中孵育 10-15 分鐘。
⒋ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒌ 滴加 Ultra V Block , 在室溫下孵育 5 分鐘以封閉非特異性的背景染色。
(注:孵育不要超過 10 分鐘,否則會導致特異性染色降低。如果一抗的稀釋液中含有 5 - 10% 正常羊血清,這一步可以省略。)
⒍ 緩沖液洗 5min/2 次。
⒎ 滴加一抗工作液 37 ℃孵育 1 - 2 小時。(具體孵育時間和溫度由試驗者最終決定)
⒏ 緩沖液洗 5min/2 次。
9 . 滴加 Primary Antibody Enhancer (增強子),在室溫下孵育 20 分鐘。
10 .緩沖液洗 5min/2 次。
11 .滴加 HRP Polymer (酶標二抗) ,在室溫下孵育 30 分鐘。
(注: HRP Polymer 對光敏感,應避免不必要的光暴露并儲存在不透明的小瓶中。)
12 .緩沖液洗 5min/2 次。
13 .向 1ml DAB Plus Substrate (或 AEC Plus Substrate) 中滴加 1-2 滴 DAB Plus Chromogen (或 AEC Plus Chromogen ),混勻后滴加到切片上,孵育 3 - 15 分鐘。(具體時間由染色深淺決定。)
14 .自來水充分沖洗,復染 ,脫水,透明,封片。
HUVEC(HUV-EC-C) (人臍靜脈血管內皮細胞)
IBRS-2(豬腎細胞)
IMR-32(人神經母細胞瘤細胞)
J82(人膀胱癌細胞)
JAR(人胎盤絨毛膜癌細胞)
JEG-3(人絨毛膜癌細胞)
JeKo-1(人套細胞淋巴瘤細胞)
Jurkat, Clone E6-1 (人急性T淋巴細胞白血病細胞)
K-562(人慢性骨髓性白血病細胞)
KB(人口腔表皮樣癌細胞)
KG-1(人急性骨髓性白血病細胞)
KLE(人子宮內膜癌細胞)
KU812(人外周血嗜堿性白血病細胞)
L1210(小鼠白血病細胞)
L6(大鼠成肌細胞)
NCTC clone 929 [L cell, L-929, derivative of Strain L](小鼠成纖維
Lec1(倉鼠卵巢細胞)
Li-7(人肝癌細胞)
LLC(小鼠肺癌細胞)
LLC-MK2(恒河猴腎細胞)
LM/TK(小鼠胸腺激酶缺陷細胞)
Lncap clone FGC(人前列腺癌細胞)
LoVo(人大腸癌細胞)
LS-174T(人結腸腺癌細胞)
LTEP-a-2(人肺腺癌細胞)
MA-782(小鼠乳腺癌細胞)
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